Las Subunidades del receptor P2X4 forman parte de los canales P2X nativos en las neuronas mientéricas del ráton.

Abstract

"El objetivo del presente estudio fue investigar si los receptores P2X4 se expresan en las neuronas mientéricas del ratón y si estos contribuyen a la formación de canales funcionales en la membrana de estas neuronas mediante técnicas moleculares y electrofisiológicas. La técnica electrofisiológica de whole-cell se utilizó para registrar las corrientes inducidas al aplicar ATP (IATP) en las neuronas mientéricas. Comparados con los canales P2X4 recombinantes (reportados por otros autores en estudios previos), los canales P2X mientéricos nativos tienen una sensibilidad al ATP (EC50=102 μM) y al α,β-metileno ATP (ningún efecto a 30 o 100 μM) relativamente baja. El BzATP fue un agonista débil de los receptores P2X nativos. KN-62 no tuvo efecto sobre éstos canales, mientras que el PPADS (IC50=0.54 μM) y la suramina (IC50=134 μM) fueron antagonistas más potentes que sobre los canales P2X4 homoméricos. Las IATP fueron potenciadas por la ivermectina (efecto que es específico sobre los receptores P2X4) y el zinc. Análisis por Western blot y RT-PCR mostró la presencia de la proteína de la subunidad P2X4 y el correspondiente transcrito de mRNA en el intestino delgado. Se encontró inmunoreactividad para el receptor P2X4 en la mayoría de las neuronas mientéricas en cultivo. La técnica de RT-PCR en célula única mostró la presencia de mRNA del receptor en el 90% de las neuronas mientéricas. Nuestros resultados muestran que el receptor P2X4 se expresa en la mayoría de las neuronas mientéricas, contribuye a las corrientes de membrana inducidas por ATP, y debido a que la mayoría de las propiedades observadas en dichas neuronas no corresponden a las de los canales P2X4 homoméricos, se propone que están formando canales heteroméricos. Los receptores P2X4 tienen una amplia distribución dentro del plexo mientérico y se esperaría que jueguen un papel importante en la vía de señalización intracelular."

"The aim of the present study was to investigate if P2X4 receptors are expressed in murine myenteric neurons and if these receptors contribute to form functional channels in the neuronal membrane by using molecular and electrophysiological techniques. The whole-cell recording technique was used to record membrane currents induced by ATP (IATP) in myenteric neurons. Compared with recombinant P2X4 receptor channels (reported by others in a previous study), native myenteric P2X receptors have a relative lower sensitivity for ATP (EC50=102 μM) and α,β- methylene ATP (not effect at 30 or 100 μM). BzATP was a weak agonist for native P2X receptors. KN-62 had no effect on myenteric P2X channels whereas PPADS (IC50=0.54 μM) and suramin (IC50=134 μM) were more potent antagonists than on P2X4 homomeric channels. IATP were potentiated by ivermectin (effect that is specific on P2X4 receptors) and zinc. Western blotting shows the presence of P2X4 protein and RT-PCR the corresponding mRNA transcript in the small intestine. Immunoreactivity for P2X4 receptors was found in most myenteric neurons in culture. Single-cell RT-PCR shows the presence of P2X4 mRNA in 90% of myenteric neurons. Our results indicate that P2X4 receptors are expressed in the majority of myenteric neurons, contribute to the membrane currents activated by ATP, and because most properties do not correspond to P2X4 homomeric channels it is proposed that they are forming heteromeric channels. P2X4 subunits have a widespread distribution within the myenteric plexus and would be expected to play an important role in cell signaling."