Caracterización de la respuesta al estrés oxidante por H2O2 en la levadura patógena oportunista Candida glabrata.

Abstract

"Candida glabrata es un hongo patógeno oportunista capaz de causar infecciones sistémicas graves en pacientes inmunocomprometidos. Una ventaja de este microorganismo es su capacidad de proliferación dentro de macrófagos, probablemente por su habilidad natural para desintoxicar las especies reactivas de oxígeno, como H2O2, generadas por el fagocito. Para entender parte de la virulencia de C. glabrata estudiamos su respuesta al estrés oxidante causado por H2O2. Presentamos el análisis de cepas mutantes en genes que codifican proteínas involucradas en la respuesta al estrés oxidante identificadas en el genoma de C. glabrata como ortólogos en S. cerevisiae: Skn7p y Yap1p, factores de transcripción de estrés oxidante; Msn2p y Msn4p, factores de transcripción de estrés general; y la única catalasa encontrada en C. glabrata Cta1p. Demostramos que C. glabrata crece a más altas concentraciones de H2O2 que Saccharomyces cerevisiae. Esta alta resistencia mostrada in vitro tanto en fase logarítmica como en fase estacionaria es completamente dependiente de la catalasa. También encontramos que ambos factores de transcripción Yap1p y Skn7p son necesarios para la adaptación y resistencia durante fase logarítmica, pero son prescindibles para la respuesta durante fase estacionaria. Las mutantes sencillas msn2Δ o msn4Δ no mostraron fenotipo en fase logarítmica, pero la doble msn2Δ msn4Δ mostró resistencia atenuada durante fase estacionaria. Asimismo, obtuvimos evidencia de que la desacetilasa dependiente de NAD+ Hst1p es un regulador de genes involucrados en la respuesta al estrés oxidante al mostrarse más resistente la mutante hst1Δ al estrés oxidante que la cepa silvestre."

"Candida glabrata is an opportunistic fungal pathogen capable of invasive infections in immunocompromised individuals. This microorganism upon infection is capable to proliferate inside macrophage cells, probably due to a natural ability to detoxify reactive oxygen species (like H2O2). In order to understand the virulence of C. glabrata, we are studying its oxidative stress response. Here we present the analysis of mutants in several genes identified in the C. glabrata genome as orthologs of S. cerevisiae: the oxidative stress transcription factors Skn7p and Yap1p, the general stress transcription factors Msn2p and Msn4p and the single catalase Cta1p. Here we show that resistance of C. glabrata to H2O2 is significantly higher when compared to S. cerevisiae. We also show that this in vitro high resistance in both growing and stationary phase cells is completely dependent on the single catalase. Furthermore, we found that either transcription factors Yap1p or Skn7p are needed for adaptation and resistance during exponential growth, but they are dispensable for the response in stationary phase. Mutations in MSN2 or MSN4 showed no phenotype in growing cells, in contrast, the double mutant msn2Δ msn4Δ showed a reduced resistance in stationary phase. In addition, we show that Hst1p NAD+-dependant deacetylase is an oxidative stress response genes regulator, as the hst1Δ mutant is more resistant than the wild-type strain."