Análisis fenotípico y genotípico de aislados clínicos secuenciales de C. glabrata

Abstract

"C. glabrata es un patógeno fúngico emergente y oportunista que posee un conjunto de atributos de virulencia que le permiten sobrevivir dentro de su hospedero y colonizar diferentes nichos dentro de éste. El objetivo de este estudio es determinar patrones de variación a nivel fenotípico y genotípico en aislados clínicos secuenciales obtenidos de un mismo paciente que ocurren durante el curso de una infección. Analizamos 40 aislados clínicos secuenciales de C. glabrata provenientes de 11 pacientes, que inicialmente identificamos con oligonucleótidos especie-específicos y genotipificamos con los marcadores moleculares para microsatélites polimórficos RPM2, MT1 y ERG3. Hemos caracterizado la respuesta de los aislados clínicos a estrés térmico y también la respuesta a estrés causado por diferentes agentes oxidantes en dos condiciones distintas: a) mediante exposición crónica a diferentes concentraciones de tres agentes oxidantes y b) por exposición aguda a peróxido de hidrógeno (H2O2) de cultivos en fase estacionaria y fase logarítmica, por último analizamos la activad enzimática de la catalasa. Encontramos que los aislados clínicos de C. glabrata de cada paciente, provienen de un mismo episodio de infección (se derivan del aislado inicial). Estos aislados pueden crecer en un amplio rango de temperaturas y tienen la capacidad de crecer en presencia constante de diferentes concentraciones de menadiona, hidroperóxido de ter-butilo (tBuOOH) y H2O2 respecto a la cepa control BG14. Además observamos que los aislados del paciente 9 muestran una resistencia mayor que la cepa control BG14 a la exposición aguda a H2O2 y estos resultados se correlacionan la actividad de la enzima Cta1. Con estos resultados concluimos que existe variación fenotípica entre aislados de diferentes pacientes y entre aislados provenientes del mismo paciente."

"C. glabrata is an emerging and opportunistic fungal pathogen that possesses a set of virulence attributes that allow it to survive within its host and colonize new niches within it. The objective of this study is to determine patterns of variation at the phenotypic and genotypic level in sequential clinical isolates obtained from the same patient that occur during the course of an infection. We analyzed 40 sequential clinical isolates of C. glabrata from 11 patients, which we initially identified with species-specific primers and genotyped with polymorphic microsatellite markers RPM2, MT1 and ERG3. We have characterized the response of clinical isolates to thermal stress and also the response to oxidative stress caused by different oxidizing agents in two different conditions: a) chronic exposure to three different oxidizing compounds and b) acute exposure to H2O2 of cultures in stationary phase and in logarithmic phase, finally we analyzed the enzymatic activity of the catalase. We found that the clinical isolates of C. glabrata from each patient come from the same infection episode (they are derived from the initial isolate). These isolates can grow in a wide range of temperatures, and have the ability to grow in the constant presence of different concentrations of menadione, ter-butyl hydroperoxide and H2O2 compared to the control strain BG14. We found that the isolates from patient 9 show higher resistance to acute exposure to H2O2 in stationary phase with respect to the control strain BG14 and these results correlate with the activity of the Cta1 enzyme."