Expresión del dominio de unión a receptor (RBD) de la variante ómicron B.1.1.529 de SARS-CoV-2 en la superficie de E. coli usando el autotransportador Ag43.

Abstract

"Durante la pandemia de COVID-19, se ha estudiado con énfasis a la proteína espícula (S) de SARS-CoV-2 debido a su importancia en el proceso de infección. La proteína S se considera como la proteína estructural más importante, ya que permite la entrada a las células epiteliales del hospedero. La espícula está presente en la superficie del virón y se encarga de mediar la entrada a la célula hospedera mediante el primer contacto virus-célula, a través del dominio de unión al receptor (RBD) que reconoce al receptor convertidor de angiotensina 2 (ACE2) en la superficie celular, posterior RBD se puede plegar independientemente del resto de la proteína S para permitir la fusión de la membrana viral y la membrana del huésped. RBD surge como objetivo al ser un dominio conservado, que ha demostrado puede emplearse en vacunas de proteína recombinante y generar inmunidad contra la variedad de cepas emergentes de SARS-CoV-2. Por ello en el presente trabajo se expresó la proteína RBD de la variante ómicron B.1.1.529 de forma recombinante en E. coli. Se utilizó al autotransportador del antígeno 43 (Ag43) para exportar la proteína RBD recombinante de 34kDa a la membrana externa de la bacteria. Se empleó la cepa BL21-SI que carece de proteasas de membrana externa lo que favoreció la acumulación de proteína recombinante y se evaluó la capacidad de Ag43 para liberar al pasajero al sobrenadante al calentarse a 60°. Este autotransportador facilitó el proceso de purificación de la proteína recombinante al reducir tiempos y gasto de reactivos."

"During the COVID-19 pandemic, the SARS-CoV-2 Spike (S) protein has been studied with great emphasis due to its importance during the infection process. The S protein is the most important structural protein, as it allows the entry into the host epithelial cells. Spike is present on the surface of the virion and is involved in the first virus-cell contact because is responsible for mediating the entry into the host cell, through the receptor binding domain (RBD), which recognizes the angiotensin converting receptor 2 (ACE2) on the cell surface, later RBD can fold independently from the rest of the S protein to allows the fusion of the viral membrane and the host membrane. RBD emerges as a target as it is a conserved domain and can be employed as active ingredient in recombinant protein vaccines that can generate immunity against the variety of emerging SARS-CoV-2 strains. Therefore, in the present work, the RBD protein of the omicron variant B.1.1.529 was expressed in E. coli. Antigen 43 (Ag43) autotransporter was used to export the 34kDa recombinant RBD protein to the outer membrane of the bacteria. The BL21-SI strain was used, which lacks outer membrane proteases, which let the accumulation of recombinant protein. Then we evaluated the ability of Ag43 to release the passenger into the supernatant when the sample is heated to 60°. This autotransporter facilitated the purification process of the recombinant protein by reducing time during the methodology and use of reagents."