Expresión de interleucina -10 humana recombinante en Bifidobacterium longum y Escherichia coli.

Abstract

"Bifidobacterium longum es una bacteria Gram positiva no patógena que forma parte de un grupo de microorganismos conocidos como probióticos. Recientemente, el interés en esta bacteria ha aumentado considerablemente no solo por sus cualidades probióticas, ya que también se ha considerado como un sistema de producción de proteínas recombinantes y como vehículo para dirigir pro-fármacos hacia superficies tumorales. La bacteria Gram-negativa Escherichia coli, es el microorganismo más comúnmente empleado en la expresión de proteínas recombinantes a nivel industrial, sin embargo su sistema de secreción de proteínas hacia medio extracelular es más complejo y son pocas las proteínas que se exportan hasta el medio de cultivo. El objetivo de este trabajo fue el diseño y construcción de un plásmido estable y funcional en Bifidobacterium longum para la expresión de Interleucina-10 humana, proteína que se ha propuesto para el tratamiento de enfermedades de carácter inflamatorio. El gen IL-10 se optimizó en paralelo para su expresión en B. longum y en E. coli, y se fusionó al péptido señal BIF3 de la β galactosidasa de B. bifidum. El vector de expresión obtenido se denominó pLR y se utilizó para transformar células de B. longum y de E. coli. La presencia de hIL-10 en medio de cultivo y células se confirmó por Western blot y se cuantificó por ELISA. El vector pLR fue funcional en ambas cepas y el péptido BIF3 resultó eficiente para la secreción de hIL-10 en E. coli."

"Bifidobacterium longum is a Gram-positive, non-pathogenic bacteria considered as probiotic. In last years the importance of Bifidobacterium spp has grown for their probiotic properties and recently has been proposed as expression system for recombinant proteins and for delivery pro-drugs target to tumor surfaces as well. Escherichia coli, is a Gram-negative bacteria frequently used for recombinant protein expression. Nevertheless, the secretory system for proteins in Gramnegative bacteria is complex and there are only few proteins exported at extracellular medium. The main objective of this work was the design and construction of a stable and functional vector for Bifidobacterium longum for the expression of human interleukine-10, which is considered as therapeutic treatment of inflammatory diseases. The IL-10 gene was optimized for both, Bifidobacterium longum and Escherichia coli, and was fused to the signal peptide BIF3 from a β- galactosidase exported by Bifidobacterium bifidum. The novel expression vector was named pLR and was used to transform Bifidobacterium longum ATCC 15707 and Escherichia coli strains. hIL-10 was confirmed by Western blot and ELISA assays. pLR vector was functional in both strains and BIF3 led the secretion of hIL- 10 in Escherichia coli."