Identificación del trasportador de glutatíón en Candida glabrata.

Abstract

"Candida glabrata es un hongo patógeno oportunista,capaz de contrarestra el estrés oxidante intrinseco,y externo al ser fagocitada por los macrófagos.Los sistemas de defensa de esta levadura hacia el estrés oxidante son las catalasa,las superoxido dismutasa y peroxidasas.Tambien,el glutatión participa como compuesto antioxidante en esta respuesta.El glutatión es esencial en casi todos los organismos eucariotes.Está involucrado en la eliminación de especies reactivas de oxigeno,en la desintoxicación de drogas y metales,y en el almacenamiento de azufre y nitrogeno.La biosintesis de este metabolito requiere de las enzimas y -Glutamilcisteina Sintetasa,codificadas por los genes GSH1 y GSH2,respectivamente.Por datos del laboratorio sabemos que el gen GSH1 es esencial, y que la mutante gsg2A presenta un mejor crecimiento en presencia de glutation.Estos datos sugieren que C.glabrata posee un trasportador de glutatión,aunque no tenga los ortólogos de los trasportadores del glutatión de Saccharomyces cerevisiae( levadura filogenéticamente cercana a C.glabrata),Opt1 y Opt2.Para empezar a caracterizar el trasporte de glutatión en C.glabrata,construimos una biblioteca genómica de esta levadura y realizamos un escrutinio encontramos en un plásmido el gen GSH1 y en otro los genes contiguos CAGL0A1067g, CAGL0A01045g,CAGL0A1023g y CAGL0A1001g.La caracterización del gen CAGL0A1001g indicó que es el responsable de suprimir la ausencia de GSH1."

"Candida glabrata is an opportunistic human fungal pathogen, able to counteract oxidative stress both intrinsic and extrinsic generated by macrophages. Some of defense systems of Candida glabrata toward oxidative stress are catalases, superoxide dismutases and peroxidases. Also, glutathione is important for this response. This metabolite is a non-protein thiol essential in almost all eukaryotic organisms, which participates in the detoxification of drugs and metals, and is important for the storage of sulfur and nitrogen. The biosynthesis of glutathione requires two enzymes, the -Glutamylcysteine Synthase and Glutathione Synthase, encoded by the GSH1 and GSH2 genes, respectively. We know that GSH1 is an essential gene, and growth of the gsh2Δ mutant strain is improved when grown in the presence of glutathione. These results suggest that Candida glabrata, despite not having the orthologues Opt1 and Opt2 which are glutathione transporters in Saccharomyces cerevisiae (closely phylogenetically related yeast), could have a glutathione transporter which helps to improve its growth. In this study, we constructed a genomic library of C. glabrata and developed a genetic screening to identify the glutathione transporter in a gsh1Δ strain complemented with the GSH1 gene in a plasmid. We screened for genomic library plasmid that would allow the gsh1Δ pGSH1 strain loose the covering plasmid. We identified 2 plasmids, one containing the GSH1 and the second which contains 4 contiguouos genes CAGL0A01067g, CAGL0A01045g, CAGL0A01023g y CAGL0A01001g. Further characterization of this plasmid showed that CAGL0A01001g is responsible for suppressing the lose of GSH1."