Desarrollo de un vector de expresión tripartita derivado en Euphorbia mosaic virus.

Abstract

"Los geminivirus constituyen una de las dos familias más diversificadas de virus de plantas, y se caracterizan por la especial morfología de sus viriones y su genoma de DNA de cadena sencilla, que se replica en el núcleo de las células. El subgrupo más numeroso de la familia Geminiviridae es el género Begomovirus, que incluye algunos de los patógenos más devastadores de cultivos agrícolas en el mundo. La naturaleza de su material genético y el reducido tamaño de sus componentes genómicos (<3 Kb) hacen a los begomovirus muy atractivos para el desarrollo de vectores de expresión en sistemas vegetales. Sin embargo, los vectores derivados de estos virus no han mostrado ser eficaces para expresar genes heterólogos mayores a ~800 pb. en tejidos vegetales, ya que los vectores con un tamaño superior a los componentes genómicos nativos son inestables, y sufren rearreglos genéticos al moverse de célula a célula. En el presente trabajo describimos una nueva estrategia para la generación de vectores de expresión derivados de begomovirus, y construímos un sistema de tres componentes virales interdependientes a partir de los componentes genómicos de Euphorbia mosaic virus-Jal, un begomovirus que tiene características poco comunes entre los miembros de su género, como la capacidad de infectar células del mesófilo, donde la producción de proteínas es más elevada. Se generaron los tres componentes del nuevo sistema de vectores, y se demostró que el componente que porta el gen reportero es funcional, ya que su producto, la proteína verde fluorescente (GFP), fue producida eficientemente en protoplastos de tabaco."

"The geminiviruses constitute the most diverse family of DNA plant viruses, and are characterized by a unique morphology of their virions, and a genome composed by one or two circular, single stranded DNA molecules, that replicate in the cell nucleus. The largest subgroup of the family Geminiviridae is the genus Begomovirus, which includes some of the most devastating pathogens of agricultural crops in the world. The nature of their genetic material, and the small size of the genomic components (<3 Kb) of begomoviruses make them very attractive for the development of expression vectors in plants. However, the begomovirus-based vectors have not been shown to be effective in expressing heterologous genes over a ~ 800 bp. length in plant tissues, because of vectors larger than the native genomic components are unstable and undergo genetic rearrangements when moving from cell to cell. In this paper we describe a new strategy for generating begomovirus-based expression vectors, and generated a system of three interdependent viral components from Euphorbia mosaic virus genomic components. EuMV is a begomovirus that has unusual features among members of the family Geminiviridae, e.g., the ability to infect mesophyll cells, where protein production is higher than that in vascular tissues, where most geminiviruses are confined. All components of the new vector system were generated, and it was demonstrated that the viral component which carries the reporter gene is functional because its product, the green fluorescent protein (GFP), was produced efficiently in tobacco protoplasts."