Análisis de las secuencias que regulan el procesamiento del transcrito del gen a1 de Candida glabrata.

Abstract

"Candida glabrata posee tres loci MTL que codifican genes ortólogos a los que confieren identidad celular sexual en Saccharomyces cerevisiae. Los loci MTL y los ortólogos de S.cerevisiae(MAT, HML Y HMR) codifican los genes a1, a1 y a2 que dan lugar a proteinas con actividad de factores trascripcionales En S. cerevisiae y C. glabrata el gen a1 posee dos intriones que se esciden del trascrito primario para dar lugar al producto proteico. En nuestro laboratorio determinamos que en C. glabarata,el procesamiento parcial y completo del trascrito solo ocurre cuando este se origina a partir del locus MTL1, pero no cuando se trascribe a partir de MTL2, aún cuando ambos ORFs del gen a1 son idénticos. En este trabajo analizamos la participación de las secuencias flaqueantes del gen a1 en el procesamiento diferencial del trascrito en C. glabrata, mediante fusiones traduccionales del gen a1 de MTL1 con la proteina GFP, y flaqueado con las secuencias al 5 y al 3 provenientes de MTL1 o de MTL2. Encontramos que se detecta una mayor producción de fluorescencia que cuando la fusión a1:: GFP está flaqueada por las secuencias propias de MTL que cuando está flaqueada por las MTL2 no está silenciado y no se procesa posiblemente debido a una etsructura más compacta de la cromatina en este locus."

"Candida glabrata contains three mating type-like loci (MTL), which contain orthologous genes to those that confer sexual cell-type identity in Saccharomyces cerevisiae The three MTL loci, like the orthologous loci in S. cerevisiae MAT, HML and HMR, contain the a1, α1 and α2 genes that encode transcription factors. The a1 gene in both species contains two introns that have to be spliced out from the primary transcript in order to produce a functional a1 protein. We found that C. glabrata partial and complete processing of the primary a1 transcript, only occurs when it is transcribed from MTL1 locus, but not from MTL2, even though both ORFs are identical. In this paper we analyzed the participation of the sequences flanking the a1 gene in the differential processing of the a1 transcript in C. glabrata. To this end we constructed translational fusions of the a1 gene (from MTL1) with GFP and flanked by 5' and 3' MTL1 or MTL2 sequences. We found that fluorescence of GFP is increased significantly when the fusion is flanked by sequences from the MTL1 locus compared to when the fusion is flanked by MTL2 sequences. Our data suggests that a1 gene from MTL2 is not silenced and not processed possibly because of a more compact chromatin structure at this locus."