Caracterización de los genes MTL de Candida glabrata en Saccharomyces cerevisiae

Abstract

"La reproducción sexual se ha descrito como una ventaja evolutiva debido a la recombinación genética que podría favorecer una mejor adaptación. Por ello es importante el estudio de la regulación de la expresión de los genes que controlan el apareamiento, y la función de las proteínas codificadas por estos genes (Cgalfa1, Cgalfa2, Cgalfa3 y Cga1). Nuestro modelo de estudio, Candida glabrata, es una levadura patógena y asexual, que posee tres loci ortólogos (MTL1, MTL2 y MTL3) a los loci que regulan el apareamiento en la levadura sexual Saccharomyces cerevisiae. En este trabajo nos propusimos determinar si los genes codificados en los loci MTL de C. glabrata pueden complementar para la función de apareamiento, a mutantes de los genes ortólogos en S. cerevisiae. Mediante ensayos de complementación heteróloga observamos que las proteínas Cgalfa1, Cgalfa2, Cgalfa3 y Cga1 de C. glabrata no conservan la función para apareamiento de S. cerevisiae. Además, determinamos la actividad de los promotores de estos genes tanto en S. cerevisiae como en C. glabrata. Para ello construimos vectores que contienen fusiones transcripcionales de los promotores de los genes de C. glabrata con la proteína fluorescente YFP y encontramos que estos promotores se reconocen en S. cerevisiae. También determinamos que son activos en C. glabrata. Sin embargo, la actividad de estos promotores es menor en C. glabrata que en S. cerevisiae. Nuestros datos sugieren que la regulación y la función de las proteínas Cgalfa1, Cgalfa2, Cgalfa3 y a1 de C. glabarata podría ser diferente a la de S. cerevisiae."

"Sexual reproduction is thought to provide evolutionary advantage due to genetic recombination, which could provide better adaptation to environmental conditions. Therefore, it is important to study the regulation of expression of the genes that control mating, as well as the function of the proteins encoded in these genes (Cgalpha1, Cgalpha2, Cgalpha3 and Cga1). Our model organism, Candida glabrata, is an asexual fungal pathogen that contains three orthologous loci to the loci that control mating in the sexual yeast Saccharomyces cerevisiae (MTL1, MTL2 and MTL3). In this work we wanted to determine whether the genes encoded in the C. glabrata MTL loci complement the mating function in S. cerevisiae. We performed heterologous complementation assays and we found that the Cgalpha1, Cgalpha2 Cgalpha3 and Cga1 genes, are unable to complement, the mating function in mating-deficient S. cerevisiae strains. We also determine the promoter activity of these genes both in S. cerevisiae and in C. glabrata. To this end we made replicative vectors containing transcriptional fusions of each promoter with the yellow fluorescent protein YFP and found that the C. glabrata promoters are recognized in S. cerevisiae and they are also functional in C. glabrata, although the activity is higher in S. cerevisiae. Our data suggests that the regulation and the function of Cgalpha1, Cgalpha2, Cgalpha3 and Cga1 proteins are different from the role they have in mating in S. cerevisiae."