Producción de antígenos inmunogénicos en plantas: un enfoque para mejorar la vacuna contra la tos ferina

Abstract

"La tos ferina es una enfermedad infecciosa de distribución mundial en la que se ha observado un aumento en la incidencia de la enfermedad en adolescentes y niños menores de 6 meses de edad. Además se ha establecido que la inmunidad adquirida con la vacuna se pierde alrededor de los siete años posteriores a la última aplicación, lo que aumenta el riesgo de contagio a partir de los diez años de edad. En la actualidad existen las vacunas acelulares contra tos ferina, pero su alto precio limita su aplicación. Por lo anterior, el presente trabajo se enfoca a expresar epítopos de Bordatella pertussis relevantes en plantas como un primer paso en el desarrollo de una vacuna comestible contra la tosferina, que produzca una respuesta inmune más duradera y/o permita el suministro de dosis de refuerzos vía oral, la cual es una vía más aceptada por el público. Se desarrollaron construcciones que codifican para epítopos relevantes de la toxina pertúsica, la hemaglutinina filamentosa y la pertactina, además, cuentan con espaciadores ricos en prolina y cola de histidinas, esta última para su purificación. Las secuencias fueron optimizadas para su expresión estable tanto en citoplasma de lechuga vía Agrobacterium tumefaciens, como en cloroplastos de tabaco vía biobalística. Se obtuvieron plantas adultas T0 transplastómicas, a las que se verificó la integración del transgén por PCR, así como la presencia del transcrito específico del tamaño esperado por RT-PCR, y se confirmó la concentración de proteína de manera indirecta medio de un ensayo inmunoenzimático con anticuerpos específicos contra la cola de histidinas. En la transformación nuclear de lechuga, se logró regenerar callos y brotes resistentes al agente de selección con la construcción utilizada. El material obtenido será analizado in vivo para ver demostrar su inmunogenicidad, para posteriormente realizar retos en ratones y demostrar su inmunoprotección. Este es el primer trabajo de la expresión de un polipéptido donde se han incluido 3 diferentes epítopos de regiones antigénicas de B. pertussis, el cual se ha expresado en plantas."