Evidencia de la función de AtGRDP1 como una proteína chaperona de RNA

Abstract

"Las proteínas ricas glicina (GRPs) tienen una región con motivos Glyn-X contiguos, que se ubica en el extremo carboxilo terminal. Se clasifican en 5 grupos, de los cuales, las proteínas del grupo IV se caracterizan por la presencia de uno o más dominios de unión a RNA, y se han denominado proteínas de unión a RNA ricas en glicina (RB-GRPs). Estas proteínas actúan como reguladores de la expresión génica a nivel post-transcripcional durante el desarrollo y en repuesta a estrés abiótico en plantas. Recientemente, nuestro grupo reportó por primera vez al gen AtGRDP1 (Glycine-Rich Domain Protein 1) en Arabidopsis, el cual codifica para una proteína de 819 aminoácidos con un dominio rico en glicinas (GRD) en el carboxilo terminal. Además del dominio GRD, contiene un dominio de función desconocida (DUF1399), y un posible motivo de unión a RNA (RNP-1). El gen AtGRDP1 tiene 8 exones y 7 intrones, se ha reportado una variante generada por splicing alternativo sobre el transcrito primario a la que denominamos AS_AtGRDP1, que en comparación con la versión AtGRDP1 “completa”, carece del dominio GRD. A pesar de descubrir que AtGRDP1 participa en la respuesta al estrés abiótico, y que puede jugar un papel regulatorio en la vía de señalización del ácido abscísico (ABA), la función de esta proteína no ha sido definida. Con el propósito de descubrir la función de la proteína AtGRDP1 completa y de AS_AtGRDP1, se evaluó su capacidad de evitar la terminación de la transcripción del gen de resistencia a cloranfenicol en la cepa RL211 de Escherichia coli. La expresión heteróloga de la versión AtGRDP1 completa confiere resistencia a cloranfenicol a la cepa RL211, lo que sugiere la capacidad de AtGRDP1 para unirse al terminador trpL y actuar como chaperona de RNA. Por el contrario, la versión AS_AtGRDP1 no confiere resistencia a cloranfenicol. Adicionalmente, se evaluó el efecto de la aplicación exógena de ABA en bajas concentraciones sobre la línea mutante del gen AtGRDP1 (Atgrdp1) durante la germinación y la formación de cotiledones. Las semillas de la línea Atgrdp1 mostraron un retraso en la germinación y una disminución en el desarrollo de cotiledones verdes en comparación con Col-0; sin embargo, mostraron menor sensibilidad al comparar contra la línea sobre-expresora del factor de transcripción ABI5 (hipersensible a ABA). En este estudio mostramos evidencia nueva de la función de la versión AtGRDP1 completa como chaperona de RNA."

"Glycine-rich proteins (GRPs) have a region with Glyn-X motifs, located at the carboxyl terminus. The GRPs are classified in 5 groups, based on the conserved domains contained. The members of group IV have one or more RNA binding domains, and they are named RNA-Binding Glycine Rich Proteins (RB-GRPs). The RB-GRPs are regulators of gene expression at the post-transcriptional level during development and in response to abiotic stress in plants. Recently, our group reported the novel gene of Arabidopsis, AtGRDP1 (Glycine Rich Domain Protein 1), which encodes a protein with a glycine rich domain (GRD) at the carboxyl terminus. Besides the GRD domain, AtGRDP1 protein contains a domain of unknown function 1399 (DUF1399) and a potential RNA binding motif (RNP-1). The AtGRDP1 gene has 8 exons and 7 introns, it has been reported a variant generated by alternative splicing of the primary transcript which lacks the GRD domain and we named AS_AtGRDP1. Despite the involvement of AtGRDP1 in the response to abiotic stress in Arabidopsis, and that AtGRDP1 could play a regulatory role in abscisic acid (ABA) signaling pathway, the function of AtGRDP1 protein has not been defined. In order to discover the function of AtGRDP1 and AS_AtGRDP1 versions, we evaluated its ability to prevent the termination of the transcription of the chloramphenicol resistance gene in Eschericha coli RL211. Heterologous expression of the full AtGRDP1 version confers chloramphenicol resistance, which suggests the ability of AtGRDP1 to bind to the trpL terminator, and acts as RNA chaperone. By contrast, the AS_AtGRDP1 version does not confer chloramphenicol resistance. Additionally, we evaluated the effect of exogenous ABA application at low concentrations on Atgrdp1 mutant line during germination and the cotyledon development. The seeds of the Atgrdp1 mutant showed a delayed germination and a reduction in the green cotyledons development compared to Col-0 seeds. However, when we compared with an ABA hypersensitive line, as ABI5 overexpressing line, the Atgrdp1 mutant is less sensitive. In this study, we show evidence that suggests that the complete AtGRDP1 protein functions as an RNA chaperone."