Sistema para expresar y transportar proteinas recombinantes al periplasma de escherichid coli por la vía de secreción Tat

Abstract

"La presente invención describe un vector de expresión que contiene un péptido señal que utiliza la vía de secreción Tat como alternativa al sistema Sec de secreción para el transporte de citocininas y otras proteínas de interés biotecnológico al periplasma de Escherichia coli. La parte novedosa de esta invención consiste en utilizar el péptido señal de la penicilino acilasa (SPpac) mutado y fusionado al gen sintético de interferón-? humano (inf.-?) para el transporte de la proteína al periplasma de Escherichia coli por vía Tat. El SPpac mutado contiene el sitio NdeI en el extremo 5', conteniendo en el vector de expresión pEMR, y en el extremo 3' el codón de triptófano se cambia por el codón de serina y con ello se genera el sitio de restricción Hind III. Se modifican los codones de Leucenia y Alanina para generar el sitio NheI. Con ello se generan dos sitios de restricción para la clonación y fusión en fase de genes de proteínas homólogas ó heterólogas. Actualmente, no hay vectores comerciales disponibles para la expresión y transporte de proteínas mediante péptidos señal de vía de transporte Tat."

"The present invention describes an expression vector which contains a signal peptide using the Tat secretion pathway as an alternative of the Sec secretion system for the transport of cytoquinine and further proteins of biotechnological interest to Escherichia coli periplasm. The novel system consists in using the signal peptide of penicillin acylase (SPpac) which is mutated and fussed to the synthetic human interferon-y gene (hINF-y) for the transport of the protein to the Escherichia coli periplasm using the Tat pathway. The mutated SPpac includes the NdeI site at the 5 end, which is contained in the expression vector pEMR, at the 3 end the tryptophan codon being exchanged by the serine codon, thus generating the restriction site Hind III. The Leucine and Alanine codons are modified so as to generate the NheI site. Thus, two sites for restricting the cloning and fusion within a gene phase of homologous or heterologous proteins are generated. Nowadays there is no commercial vector available for the expression and transport of proteins, which include signal peptides using the Tat pathway."