Diseño de un sistema de expresión de proteínas heterólogas en Bacillus subtilis

Abstract

"Bacillus subtilis es una bacteria Gram positiva, no patógena, aerobia que secreta gran cantidad de proteínas al medio de cultivo por lo tanto existe un gran interés comercial para la producción de proteínas heterólogas. Debido a que se disponen de pocos vectores de expresión para B. subtilis, se propone diseñar un nuevo sistema de expresión mediante dos vectores con base en el sistema del promotor del fago T7. El sistema, consiste en un vector integrativo que contiene al gen de la polimerasa T7 bajo el control del promotor constitutivo p43 y un vector replicativo que contiene el gen de interés regulado por el promotor de la polimerasa T7. El vector cuenta con un péptido señal perteneciente a la vía de secreción Sec y un marco de lectura abierto. La funcionalidad del sistema de expresión se evaluó utilizando el gen reportero de la proteína verde fluorescente (GFP) y posteriormente se utilizarán para la producción de la Vasostatina (Vs30), Vasoinhibina (Vi II-14.1) y una proteína quimérica Vs_Vi."

"Bacillus subtilis is a non-pathogenic, Gram positive aerobic bacterium that secretes large amounts of proteins into the culture medium, so there is high commercial interest for heterologous protein production. There are few expression vectors for B. subtilis, we have designed a new expression system using two vectors based on the phage T7 promoter. The system consists of an integrative vector containing the T7 polymerase gene under the constitutive promoter p43, and a replicative vector containing the gene of interest regulated by the T7 polymerase promoter. The vector has a signal peptide belonging to the Sec secretion pathway and open reading frame. The functionality of the expression system was assessed using the reporter gene green fluorescent protein (GFP), and subsequently it will be used for the production of Vasostatin (Vs30), Vasoinhibin (Vi II-14.1) and a chimeric protein Vs_Vi."