Caracterización de Abf1 en Candida glabrata

Abstract

"Caracterización de Abf1 en Candida glabrata Abf1 o ARS binding factor 1 es una proteína de unión a ADN que participa en múltiples procesos celulares en la levadura Saccharomyces cerevisiae, tales como la regulación transcripcional de genes de diferentes vías metabólicas, en la replicación del ADN, en el silenciamiento de los loci HML y HMR, así como en reparación de ADN. Por otra parte, en Candida glabrata un hongo patógeno oportunista filogenéticamente cercano a S. cerevisiae, se ha identificado un ortólogo de este gen (CgABF1) y se determinó que es esencial para su viabilidad y que participa en el silenciamiento subtelomérico de varios genes EPA que codifican para adhesinas y son unos de sus factores de virulencia. El objetivo de este trabajo fue determinar la función de Abf1 en C. glabrata. Para ello diseñamos un sistema de expresión condicional de ABF1 con el promotor del gen MET3, y determinamos si había pérdida de viabilidad cuando reprimimos su expresión adicionando metionina y cisteína al medio. También estudiamos cómo se afecta el ciclo celular y cambios en la morfología celular cuando se reprime ABF1. Encontramos que el crecimiento se detuvo y disminuyó su viabilidad después de 6 h de represión por estos aminoácidos. También se afectó la morfología y se alargó el ciclo celular. Concluimos que la represión de Abf1 conduce a un retraso en el ciclo celular, pero al cabo de 6 h las células se dividen sin haber terminado las fases anteriores, lo que resulta en disminución de la viabilidad."

"Abf1 or ARS binding factor 1, is a DNA binding protein involved in multiple cellular processes in the yeast Saccharomyces cerevisiae, such as the transcriptional regulation of diverse metabolic pathways, DNA replication, silencing of the cryptic mating loci HML and HMR and DNA damage repair. In Candida glabrata, an opportunistic fungal pathogen closely related phylogenetically to S. cerevisiae, the orthologous CgABF1 has been identified and we have determined that it is essential for viability and that it participates in the subtelomeric silencing of several EPA genes, which code for adhesins and constitute some of the virulence factors of this pathogen. In this work, we sought to determine the function of CgAbf1 in C. glabrata. To do this, we designed a conditional expression vector for the transcriptional repression of CgABF1 under the MET3 promoter by the addition of the amino acids methionine and cysteine. We determined that repression of CgAbf1 resulted in decrease of viability after 6 h loss of viability after 6 h of repression. We also observed that the passage through the cell cycle was delayed and taken longer in the absence of CgAbf1 and that the cell morphology was also affected. We conclude that repression of Abf1 leads to a delay in the cell cycle. However, after 6 h the cells divide without having completed the previous phase of the cell cycle, which results in cell death."