MICRORNAS Y VESÍCULAS EXTRACELULARES EN SANGRE

Abstract

Objetivo: Los miRNAs en las tarjetas de tamiz neonatal (NBSC) podrían servir como biomarcadores tempranos de enfermedades conforme a la teoría de la ontogenia de la salud y la enfermedad (DOHaD). Sin embargo, se desconoce si estos miRNAs en NBSC están libres o encapsulados en vesículas extracelulares (EVs). En este estudio se evaluó la presencia de miRNAs libres o encapsulados en EVs en muestras de sangre seca (DBS) en NBSC. También se evaluó el tratamiento de NBSC con una solución de trehalosa 25 mM (TP) y su impacto en el rendimiento de recuperación de miRNAs en DBS y EVS de NBSC. Métodos: Quince muestras de sangre capilar de neonatos se colectaron en NBSC estándar y con pretratamiento TP. Posteriormente se recuperaron las EVs presentes en las DBS en NBSC mediante un sistema acuoso de dos fases (ATPS) y se analizaron mediante microscopía electrónica de transmisión (TEM), dispersión dinámica de la luz (DLS) y el ensayo aumentado de colorimetría nano plasmónica (CONAN). En cada muestra de DBS en NBSC, estándar y tratada con TP, se purificaron y cuantificaron los miRNAs totales y los miRNAs de EVs. Además, se identificaron por PCR a miR-486, miR-33b y miR-375 a partir de EVs de DBS en NBSC. Resultados: Se observaron EVs con tamaños entre 20 y 100 nm en las muestras de DBS en NBSC. Se confirmo la presencia de miRNAs encapsulados en EVs. No se encontraron diferencias significativas entre las NBSC estándar y con tratamiento (TP) en el rendimiento de recuperación de miRNAs en EVs y DBS de NBSC. Fue confirmada la presencia de miR-33b, miR-486 y miR-375 en EVS de DBS en NBSC. Conclusiones: Es posible aislar EVs y purificar miRNAs a partir de DBS en NBSC. Los miRNAs en DBS se encuentran en forma libre y encapsulados en EVs. El tratamiento de NBSC con TP no parece afectar la recuperación de miRNAs. Nuevas posibilidades para la investigación de EV-miRNAs en NBSC y su potencial como biomarcadores se plantean con este estudio, contribuyendo al área de la teoría de DOHaD.

Objective: MiRNAs on neonatal screening cards (NBSCs) could serve as early biomarkers of diseases according to the Developmental Origins of Health and Disease (DOHaD) theory. It is unknown whether these miRNAs in NBSC are free or encapsulated in extracellular vesicles (EVs). This study evaluated the presence of free or encapsulated miRNAs in EVs in dried blood samples (DBS) in NBSC. A 25 mM trehalose (TP) solution in NBSC was assessed to see if it affected the recovery performance of miRNAs in DBS and EVS of NBSC. Methods: Fifteen capillary blood samples from neonates were collected in standard NBSC and with TP pretreatment. The EVs present in DBS in NBSC were recovered using a two-phase aqueous system (ATPS) and analyzed by transmission electron microscopy (TEM), dynamic light scattering (DLS), and augmented nano plasmonic colorimetry assay (CONAN). In each DBS sample in NBSC, standard and treated with TP, total miRNAs, and from EVs, were purified and quantified. In addition, miR-486, miR-33b, and miR-375 were identified by PCR from EVs recovered from DBS at NBSC. Results: EVs with sizes between 20 and 100 nm were observed in DBS samples. The presence of miRNAs encapsulated in EVs was confirmed. In the recovery of miRNAs with TP treatment, no significant differences were found concerning standard NBSC. The presence of miR-33b, miR-486, and miR-375 in EVS in NBSC samples was confirmed. Conclusions: It is possible to isolate EVs and purify miRNAs from DBS in NBSCs. The miRNAs in DBS are in free form and encapsulated in EVs. Treatment of NBSC with TP does not appear to affect miRNA recovery. This study raises new possibilities for investigating EV-miRNAs in NBSC and their potential as biomarkers, contributing to the DOHaD theory area.