Caracterización funcional de Abf1 en diferentes procesos metabólicos del ADN en Candida glabrata (Nakaseomyces glabratus)

Abstract

"Candida glabrata es un hongo comensal que puede comportarse como patógeno que ha sido clasificado como un agente causante de infección de alto riesgo debido a su resistencia innata y adquirida a antifúngicos y al incremento en su tasa de incidencia. Uno de sus principales factores de virulencia es la adherencia a tejidos epiteliales del hospedero, la cual se debe a la expresión de genes que codifican proteínas de la pared principalmente pertenecientes a la familia Epa. La transcripción de los genes EPA está sujeta a una regulación por silenciamiento subtelomérico, mediada por factores como Rap1, yKu70/80 el complejo SIR (Sir2, Sir3 y Sir4) y la proteína Abf1. Abf1 o ARS-Bindig Factor 1, es una proteína que se une en todo el genoma y ha sido ampliamente caracterizada en S. cerevisiae. Previamente, en nuestro grupo de investigación, determinamos que ABF1 es un gen esencial en C. glabrata, involucrado tanto en el establecimiento y mantenimiento del silenciamiento subtelomérico como en la regulación del ciclo celular. En este trabajo, investigamos el papel de Abf1 en la regulación de distintos procesos del ADN. Para ello, analizamos los efectos de la represión de ABF1 mediante el uso de un promotor condicional que se reprime en presencia de aminoácidos; bajo estas condiciones, identificamos mutaciones supresoras que rescatan la viabilidad celular en ausencia de Abf1 y determinamos que dicha supresión no está asociada al plásmido. Por otro lado, encontramos que la transcripción de ABF1 se autorregula negativamente y Abf1 forma homodímeros que se localizan en el núcleo. Asimismo, encontramos que Abf1 de S. cerevisiae complementa de manera heteróloga a la cepa abf1∆ de C. glabrata. Finalmente, demostramos que Abf1 es importante para la supervivencia de C. glabrata después del daño al ADN por radiación UV y destacamos el papel crucial de la región C-terminal en este proceso. Además, Abf1 es necesario para la asimilación de fuentes de carbono no fermentables."

"Candida glabrata is a commensal fungus that can behave as a pathogen and has been classified as a high‑risk infectious agent due to its innate and acquired resistance to antifungals and the increase in its incidence rate. One of its main virulence factors is adherence to epithelial tissues in the host, which is due to the expression of genes that encode cell wall proteins, mainly belonging to the Epa family. Transcription of the EPA genes is subject to regulation by subtelomeric silencing, mediated by factors such as Rap1, yKu70/80, the SIR complex (Sir2, Sir3 and Sir4), and the Abf1 protein. Abf1, or ARS-Binding Factor 1, is a protein that binds throughout the genome and has been extensively characterized in S. cerevisiae. Previously, in our research group, we determined that ABF1 is an essential gene in C. glabrata, involved both in the establishment and maintenance of subtelomeric silencing and in the regulation of the cell cycle. In this work, we investigated the role of Abf1 in the regulation of different DNA processes. To this end, we analyzed the effects of ABF1 repression by using a conditional promoter that is repressed in the presence of amino acids; under these conditions, we identified suppressor mutations that rescue cell viability in the absence of Abf1 and determined that this suppression is not associated with the plasmid. On the other hand, we found that ABF1 transcription is negatively autoregulated and that Abf1 forms homodimers that localize to the nucleus. Likewise, we found that S. cerevisiae Abf1 heterologously complements the C. glabrata abf1∆ strain. Finally, we show that Abf1 is important for the survival of C. glabrata after DNA damage caused by UV radiation and we highlight the crucial role of the C‑terminal region in this process. In addition, Abf1 is required for the assimilation of non‑fermentable carbon sources."