Identificación de un elemento en cis que coopera con la maquinaria del silenciamiento para regular la expresión del gen EPA1 de Candida glabrata

Abstract

"Candida glabrata es un importante patógeno oportunista que causa candidiasis sistémica y en mucosas. C. glabrata es capaz de adherirse a células epiteliales de mamífero. En la cepa BG2, la adherencia está mediada principalmente a través de la adhesina Epa1. El gen EPA1 pertenece a una familia compuesta de aproximadamente 23 parálogos que codifican potencialmente para adhesinas. Los genes EPA se encuentran localizados en regiones subteloméricas, lo que tiene como consecuencia una regulación negativa de la transcripción llamada silenciamiento subtelomerico similar al descrito en S. cerevisiae. En este estudio nos enfocamos en el estudio de la regulación de la transcripción del gen EPA1. Nuestros datos muestran que la expresión del gen EPA1 se regula negativamente por dos mecanismos distintos. La activación del gen EPA1 ocurre inmediatamente después de diluir las células de fase estacionaria en medio fresco, sin embargo la transcripción se reprime rápidamente, limitándose la expresión a la fase lag justo después de que salen de la fase estacionaria. La represión de la transcripción del gen EPA1 se lleva a cabo por el silenciamiento subtelomérico donde participan el Complejo Sir (Sir2, Sir3 y Sir4), Rap1, Rif1, y yKu70 y yKu80. Para la represión se requiere también un elemento negativo (EN) regulador que actúa en cis, localizado en la región intergénica 3´ entre EPA1 y EPA2 y su actividad es independiente de la proximidad al telómero. Un análisis bioinformático del EN muestra que hay 10 copias presentes en el genoma de Candida glabrata asociadas con otros genes EPA así como otro tipo de genes."

"Candida glabrata is an important opportunistic pathogen causing both bloodstream and mucosal candidiasis. C. glabrata is able to adhere avidly to mammalian epithelial cells. In the BG2 strain background, adherence is mediated primarily by the Epa1 adhesin. EPA1 is a member of a large gene family of about 23 paralogues that encode putative adhesins. The EPA genes are encoded at subtelomeric loci where they are subject to chromatin-based transcriptional silencing similar to the sub-telomeric silencing characterized in S. cerevisiae. In this study, we address how EPA1 transcription is regulated. Our data show that EPA1 expression is subject to two distinct negative regulatory mechanisms. EPA1 transcription is repressed by sub-telomeric silencing: the Sir Complex (Sir2, Sir3 and Sir4), Rap1, Rif1, yKu70 and yKu80 are required for full repression. Activation of EPA1 occurs immediately after dilution of stationary phase cells into fresh media; however, transcription is rapidly repressed again, limiting expression to lag phase, just as the cells exit stationary phase. This repression following lag phase requires a cis-acting regulatory negative element (NE) located in the EPA1 3’ intergenic region, and is independent of telomere proximity. Bioinformatic analysis shows that there are 10 copies of the NE-like sequence in the Candida glabrata genome associated with other EPA genes as well as non-EPA genes."