Diseño de un sistema de expresión de proteínas recombinantes del virus de influenza A (H7N9) en Bacillus subtilis

Abstract

"La influenza es una enfermedad infecciosa provocada por el virus de la influenza, sus principales hospederos son las aves silvestres, sin embargo, puede infectar personas, aves de corral, cerdos y otros animales. Actualmente el virus de la influenza A (H7N9) forma parte de un subgrupo de virus gripales que normalmente circulan en las aves, sin embargo, recientemente se ha reportado la aparición de graves epidemias humanas causadas por este virus. Esto ha generado la necesidad de desarrollar nuevas alternativas para la producción de vacunas candidatas. Los estudios más recientes muestran que la producción de proteínas recombinantes es una estrategia viable para dicho propósito. El presente trabajo tiene la finalidad de desarrollar un sistema de expresión de proteínas recombinantes de influenza A (H7N9) en Bacillus subtilis. Debido a que se disponen de pocos vectores de expresión para B. subtilis, en este trabajo se diseñó un sistema de expresión bajo el promotor del fago T7. El sistema consiste en un vector replicativo que contiene los genes de las proteínas virales hemaglutinina (HA), neuraminidasa (NA) y de matriz (M1). Además, el vector cuenta con un péptido señal perteneciente a la vía de secreción TAT. La funcionalidad del sistema de expresión y secreción se evaluó mediante análisis por western blot y microscopía de fluorescencia utilizando el gen reportero de la proteína verde fluorescente. Posteriormente se utilizará para la producción de proteínas del virus de influenza A (H7N9)."

"Influenza is an infectious disease caused by the influenza virus, its main hosts are wild birds, but can infect people, poultry, pigs and other animals. Currently the influenza A virus (H7N9) is part of a subgroup of influenza viruses that normally circulate in poultry, however, it has recently been reported the occurrence of serious human epidemics caused by this virus. This has created the need for development of new alternatives for the production of vaccine candidates. The most recent studies show that the production of recombinant proteins is a viable strategy for that purpose. This study aims to develop an expression system for recombinant proteins of influenza A (H7N9) in Bacillus subtilis. Because there are few expression vectors for B. subtilis, in this work we designed an expression system under the T7 phage promoter. The system consists of a replicative vector containing the genes of viral proteins hemagglutinin (HA), neuraminidase (NA) and matrix (M1). Furthermore, the vector has a signal peptide belonging to the TAT secretion pathway. System expression functionality and secretion were assessed by western blot analysis and fluorescence microscopy using the reporter gene green fluorescent protein. Subsequently it will be used for the production of proteins of influenza A (H7N9)."