Caracterización molecular y fenotípica de aislados clínicos secuenciales de Candida glabrata pertenecientes a un mismo paciente

Abstract

"Candida glabrata se ha convertido en un patógeno fúngico humano frecuentemente aislado de infecciones del torrente sanguíneo. El éxito de C. glabrata como patógeno se debe en parte a la presencia de varios factores de virulencia como la alta resistencia al estrés oxidante, resistencia innata a los antifúngicos azólicos y la adherencia a dispositivos médicos y células epiteliales y endoteliales del hospedero. En este trabajo seleccionamos 34 aislados correspondientes a 10 pacientes. Para probar si todos los aislados del mismo paciente muestran el mismo genotipo, los caracterizamos genotípicamente mediante el ensayo de amplificación aleatoria de DNA polimórfica (RAPD, por sus siglas en inglés), con los oligonucleótidos OPA-09, OPA-18 y OPE-18, y también determinamos el tamaño de los minisatélites presentes en el gen EPA1. Todos los aislados de cada paciente muestra el mismo patrón con los marcadores de RAPD utilizados (clasificados en 4 genotipos) y el mismo tamaño de los minisatélites de EPA1 (los cuales varían entre 800 a 1000 pb), lo cual sugiere fuertemente que el último aislado se deriva del aislado inicial de cada paciente. Determinamos la susceptibilidad a Fluconazol (FLC) utilizando el método estandarizado del Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). Encontramos que la mayoría de los aislados se clasifican como sensibles a FLC, aunque con diferentes dosis inhibitorias (MIC50). En dos pacientes (P6 y P7) hubo una tendencia hacia el incremento en la MIC50 a FLC entre el primer aislado y el último aislado de cada paciente. Así mismo, el último aislado del paciente 1 (P1) mostró una disminución en la MIC50 respecto al primer aislado del P1. En conclusión, en este trabajo hemos encontrado que cada paciente estudiado posee una sola cepa de C. glabrata desde el inicio de la infección y que en algunos casos se pueden detectar cambios fenotípicos entre el primer y el último aislado de C. glabrata de un mismo paciente durante el transcurso de la infección. Encontramos que, en este grupo de aislados, el genotipo y la sensibilidad a FLC son independientes. Además, con el Análisis de Componentes Principales (PCA, por sus siglas en inglés), es posible identificar las tendencias de agrupación entre los aislados de C. glabrata clasificados por su resistencia a FLC."

"Candida glabrata has become a human fungal pathogen frequently isolated from bloodstream infections. The success of C. glabrata as a pathogen is due in part to the presence of several virulence factors such as high resistance to oxidative stress, innate resistance to azole antifungals, and adherence to medical devices and host epithelial and endothelial cells. In this work we selected 34 isolates corresponding to 10 patients. To test whether all isolates from the same patient come from a single strain, we characterized them genotypically using the RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA) assay with oligonucleotides OPA-09, OPA-18 and OPE-18, and we also determined the size of the minisatellites within the EPA1 gene. All the isolates from each patient displayed the same pattern with the RAPD markers used (classified into 4 genotypes) and the same size of the EPA1 minisatellites (which vary between 800 to 1000 bp). This strongly suggests that the last isolate It is derived from the initial isolate of each patient. We determined the susceptibility to Fluconazole (FLC) using the standardized method of the Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). We found that most of the isolates are classified as sensitive to FLC, although with different inhibitory doses (MIC50). In two patients (P6 and P7) there was a trend towards an increase in the MIC50 to FLC between the first isolate and the last isolate from each patient. Likewise, the last isolate from patient 1 (P1) showed a decreased MIC50 compared to the first isolate from P1. In conclusion, in this work we found that each patient studied was infected with a single strain of C. glabrata from the beginning of the infection and that in some cases phenotypic changes can be detected between the first and the last isolate from the same patient during the course of infection. We found that, in this group of isolates, the genotype and sensitivity to FLC are independent. Furthermore, with the Principal Component Analysis (PCA), it is possible to identify the clustering trends among the C. glabrata isolates classified by their resistance to FLC."