Localización de la proteína SOL1, involucrada en autoinmunidad, en maíz y en un sistema heterólogo.

Abstract

"Localización de la proteína SOL1, involucrada en autoinmunidad, en maíz y en un sistema heterólogo. Las plantas cuentan con una regulación estricta para evitar la activación, en momentos no requeridos, de los procesos desencadenados por el sistema inmune; sin embargo, mutaciones en los receptores del sistema inmunes activan de manera constitutiva la respuesta inmune aún sin la presencia de patógenos, originando así autoinmunidad en la planta y produciendo fenotipos anormales. Estas mutantes se caracterizan por enanismo, niveles elevados de ácido salicílico, expresión constitutiva de genes de defensa como por ejemplo los relacionados con la patogénesis generando una resistencia mejorada a patógenos. Las mutantes autoinmunes proveen un sistema útil para el estudio de la respuesta inmune de las plantas, ya que aportan una perspectiva más profunda de los mecanismos de señalización involucrados en la defensa. El estudio de una de las proteínas que codifican uno de esos genes mutados en maíz, como de sus posibles interactores, podría ayudar a entender mejor el mecanismo de defensa en gramíneas. La identificación de Sol1 entre variedades endogámicas, así como la información generada acerca de los mecanismos moleculares que ocurren en respuesta a estrés biótico y abiótico en estas especies, será de gran utilidad en el diseño de estrategias para mitigar los daños ocasionados en las plantas cultivadas. En este trabajo logramos purificar un anticuerpo Anti-SOL1 a partir de un antisuero producido en conejo, del cual obtuvimos tres lotes diferentes de anticuerpos purificados por afinidad: uno usando la proteína desnaturalizada, otro la proteína renaturalizada y el último, un péptido sintético específico de SOL1. Estos anticuerpos se validaron por Western blot usando las proteínas recombinantes y se probó su utilidad en experimentos de inmunolocalización en tejidos de maíz, detección por Western blot en extractos de tejidos de maíz y para determinar la localización de la proteína SOL1 etiquetada con YFP expresada en N. benthamiana."

"Plants have a strict regulation to avoid the activation, at times not required, of the processes triggered by the immune system; however, mutants in the immune receptors constitutively activate the immune response even without the presence of pathogens, thus causing autoimmunity in the plant and producing abnormal phenotypes. These mutants are characterized by dwarfism, high levels of salicylic acid, constitutive expression of defense genes such as those related to pathogenesis, generating improved resistance to pathogens. The autoimmune mutants provide a useful system for studying the immune response of plants, they provide a deeper perspective of the signaling mechanisms involved in defense. The study of one of the proteins that encodes one of these mutated genes in maize, as well as its possible interactors, could help to better understand the mechanism of grass defense. The identification of Sol1 among inbred varieties, as well as the information generated about the molecular mechanisms that occur in response to biotic and abiotic stress in these species, will be very useful in the design of strategies to reduce the damage caused in cultivated plants. In this work, we purified an Anti-SOL1 antibody from rabbit serum, from which we obtained three different batches of purified antibodies by affinity: one to denatured protein, other to renatured protein and the last one to a synthetic peptide specific of SOL1. These antibodies were validated by Western blot using recombinant proteins. We tested their utility in experiments of immunolocalization on maize tissues, Western blot detection in maize tissue extracts and to determine the localization of the YFP- tagged SOL1 protein expressed in N. benthamiana."