Coexpresión de la penicilino acilasa y chaperonas moleculares en Escherichia coli.

Abstract

"La penicilino acilasa (PA) hidroliza la penicilina G produciendo ácido fenilacético y ácido 6-aminopenicilánico, siendo este último precursor de varios antibióticos semisintéticos. En el presente trabajo se evalúo la co-expresión de chaperonas moleculares para analizar el papel de estas en la expresión de la PA. Las chaperonas estudiadas fueron: DnaK-DnaJ; GroEL-GroES; ClpB y DnaK-DnaJGrpE- ClpB. Al utilizarse IPTG (25 μM) como inductor se presentó un aumento del 33.3% en la actividad de PA en el caso de DnaK-DnaJ; pero al expresarse GroELGroES la actividad disminuyó un 70.8%; un 60.4% al expresarse ClpB y un 29.2% en el caso de DnaK-DnaJ-GrpE-ClpB. Cuando solo se utilizó galactosa (5 g/l) hubo un aumento del 2.4% en la actividad de PA cuando se expresó DnaK-DnaJ y 4.8% para DnaK-DnaJ-GrpE-ClpB; mientras que disminuyó un 76.2% y 59.5% para el caso de GroEL-GroES y ClpB respectivamente. Por lo que, de las chaperonas evaluadas DnaK-DnaJ, al ser inducidas con IPTG, son las que mostraron un mejor rendimiento en la actividad de PA, mientras que GroEL-GroES por otro lado disminuye notablemente dicha actividad. Aún es necesario analizar el papel de más chaperonas especialmente las relacionadas con la vía Tat y la vía de autotransporte, que se llevará a cabo utilizando el dominio β del autotransportador MisL perteneciente a Salmonella enterica."

"The penicillin acylase (PA) hydrolyzes penicillin G to produce phenylacetic acid and 6-aminopenicillanic acid, which is a precursor of several semi-synthetic antibiotics. We evaluated the co-expression of molecular chaperones to analyze the role of these in the expression of PA. The chaperones studied were DnaK, DnaJ, GroEL-GroES, ClpB and DnaK-DnaJ-GrpE-ClpB. When we used IPTG (25 μM) as inducer it was shown an increase of 33.3% in the activity of PA in the presence of DnaK-DnaJ, but in the presence of GroEL-GroES, ClpB and DnaKDnaJ- GrpE-ClpB the activity decreased 70.8%, 60.4% and 29.2%, respectively. When we used galactose only (5 g/l) there was an increase of 2.4% and 4.8% in the PA activity when DnaK-DnaJ and DnaK-DnaJ-GRPE-ClpB were overexpressed, respectively. But in the presence of ClpB and GroEL-GroES the activity of PA decreased 76.2% and 59.5%, respectively. Therefore, DnaK-DnaJ overexpressed with IPTG, showed a slight improvement on the activity of PA, meanwhile GroEL-GroES decreases significantly such activity. It will be needed further studies in order to analyze the role of more chaperones, in particular, those related to the Tat and autotransporter pathways. The last pathway will be evaluated using the β domain of the autotransporter MisL that belongs to Salmonella enterica."