Farmacogenética de las reacciones cutáneas adversas a lamotrigina

Abstract

"Contexto. Las reacciones cutáneas adversas (RCA) a fármacos antiepilépticos (FAE) incluyen el exantema maculopapular, el síndrome de Stevens-Johnson y la necrólisis epidérmica tóxica y son un problema de salud pública y una de las causas principales de morbimortalidad por medicamentos. La lamotrigina (LTG) destaca entre los FAE porque no afecta la cognición ni causa sedación. Aunque infrecuentes, las RCA a LTG obligan a abandonar el tratamiento y afectan la calidad de vida de los pacientes y el temor a ellas inhibe la prescripción de LTG a pesar de sus ventajas terapéuticas. En diversas poblaciones se ha encontrado que ciertas variantes alélicas HLA asociadas a RCA son fármaco-específicas y que la etnia es importante. Se han descrito 17 variantes alélicas de los genes HLA A, B, y C asociadas a RCA por LTG en diferentes etnias, las cuales incluyen cinco variantes y un haplotipo en mestizos mexicanos. Objetivo. Desarrollar un método que identifique las variantes alélicas HLA asociadas a RCA por LTG en mestizos mexicanos basado en la secuenciación de los segmentos génicos respectivos. Métodos. Delimitamos los segmentos de los genes HLA A, B y C que contienen las secuencias características de las variantes alélicas HLA asociadas a RCA por LTG en mestizos mexicanos. Seleccionamos tres parejas de oligonucleótidos para generar por PCR los amplicones HLA A (985 pb), HLA B (943 pb) y HLA C (919 pb), que incluyen las secuencias de las variantes clínicamente relevantes. Determinamos las condiciones de las mezclas de PCR para generar los tres amplicones puros para secuenciarlos con el método de didesoxinucleótidos e identificamos las variantes alélicas de interés mediante análisis bioinformático de la secuencia de los amplicones en la base de datos IMGT/HLA. Resultados. Las tres parejas de oligonucleótidos seleccionadas generaron los amplicones HLA A, B y C esperados a partir del DNA genómico de un sujeto humano no susceptible a LTG. Clonamos el amplicón HLA B en el vector pGEM y usamos la construcción para generar una cantidad suficiente del inserto para secuenciarlo. Las secuencias de los tres amplicones generados a partir del DNA genómico humano correspondieron a las variantes alélicas HLA A*24:470, HLA B*07:359 y HLA C*04:199, que no están asociadas a RCA por LTG. Conclusiones. El nuevo método permite identificar las variantes alélicas HLA A, B y C y podrá emplearse para identificar las variantes asociadas a RCA por LTG en mestizos mexicanos, para así excluir del tratamiento con LTG a los pacientes epilépticos potencialmente susceptibles al medicamento."

"Background. Cutaneous adverse reactions (cADR) to antiepileptic drugs (AEDs) include maculopapular exanthema, Stevens-Johnson syndrome and toxic epidermal necrolysis; they are a public health problem and one of the leading causes of morbidity and mortality by drugs. Lamotrigine (LTG) stands out among AEDs because it does not affect cognition and does not cause sedation. Although infrequent, cADR to LTG force abandonment of the treatment and affect the quality of life of the patients; furthermore, fear of cADR inhibits LTG prescription despite its therapeutic advantages. In diverse populations have been identified drug-specific HLA allelic variants associated with cADR. Seventeen HLA-A, -B, and -C allelic variants are associated with cADR by LTG in different ethnicities, including five variants and one haplotype in Mexican mestizos. Objective. To develop a method to identify the HLA allelic variants associated with cADR by LTG in Mexican mestizos, based on the sequencing of the corresponding gene segments. Methods. The segments of the HLA-A, -B and -C genes containing the characteristic sequences of the HLA allelic variants associated with cADR by LTG in Mexican mestizos were delimited. Three pairs of oligonucleotides were selected to generate by PCR the amplicons HLA-A (985 bp), HLA-B (943 bp) and HLA-C (919 bp) that include the sequences of the clinically relevant variants. The conditions of PCR mixtures were determined to generate the three pure amplicons in order to sequence them with the dideoxynucleotide method and to identify the allelic variants of interest by bioinformatic analysis of the amplicon sequences in the IMGT/HLA database. Results. The three oligonucleotide pairs selected generated the HLA-A, -B and -C amplicons expected from genomic DNA of a human subject not susceptible to LTG. The HLA-B amplicon was cloned in the pGEM vector and the construct was used to generate sufficient amount of the insert for sequencing. The sequences of the three amplicons generated from human genomic DNA corresponded to the allelic variants HLA-A* 24:470, HLA-B*07:359 and HLA-C*04:199, not associated with cADR by LTG. Conclusions. The new method identifies HLA-A, -B and -C allelic variants and may be used to identify the variants associated to cADR by LTG in Mexican mestizos, in order to exclude from LTG treatment to the epileptic patients potentially susceptible to the drug."